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組培培養基配制流程及注意要點

時間:2017-05-16來源:http://www.bngkd.com/news/205.html

培養基配制的時候,要提前做好準備工作,要通過培養物以及培養的目的進行培養基的制作。;再根據培養材料以及實驗處理的多少,确定培養基的用量;然後準備好所需的用具。培養基灌裝機提醒大家,在配制的時候要注意一些流程和要點。

培養基配制流程

培養基灌裝機

1. 将貯存的各種母液按順序依次放好。

2. 将各種潔淨的玻璃器皿如培養瓶、量筒、燒杯、吸管、玻璃棒、漏鬥等,放在指定的位置。準備好蒸餾水或無離子水及瓶蓋或封口膜、包紙、橡皮筋等。

3. 稱取規定量的瓊脂和蔗糖,将瓊脂置于精鋼鍋或者電飯煲中,加水至培養基最終容積的3/4或1/2,随之加熱并用玻璃棒進行攪拌使之溶解,注意防止煳鍋底和溢出。瓊脂必須完全溶化,以免造成濃度不均。瓊脂不能過多,不然會導緻培養基太硬,含水太少,通氣不良;反之,培養基太軟,植物材料則難以固定。由于瓊脂較難溶解,所以在制備培養基時,應首先加熱溶解。

4. 按母液順序,根據不同母液的濃縮倍數移取規定的量(查看《母液的配制方法和濃縮倍數》)。

各母液移取量計算公式為:

母液移取量(ml)= 待配制培養基體積(ml)/母液的擴大倍數

激素母液移取量(ml)=  培養基所需的激素質量(mg)/ 母液濃度(mg/ml)

如配制1L MS培養基移取擴大10倍的大量元素母液為100mL。

母液加完後,再經過計算加入所需要的植物生長調節劑。

在加入母液或生長調節劑時,應事先檢查這些藥品是否已經變色或産生沉澱,若出現這些現象就停止使用。加完後一并倒入已溶化的瓊脂中。

5. 加蒸餾水定容至培養基的最終容積。

6. pH值調整。培養基的pH值(酸堿度)直接影響培養物對離子的吸收,所以過酸或過堿都會影響植物的生長。此外,瓊脂培養基的pH值還影響到其凝固程度,所以當培養基配制好以後,應随即進行pH值的調整(一般pH值為5.6-6.0)。

最好是用酸度計測試,即快又準,如無此設備也可以用精密pH試紙(應在幹燥容器中保存,以免吸潮而失效)。若培養基偏酸就用1mol/L的氫氧化鈉來調節,偏堿則用1mol/L的鹽酸來調節。

經高壓蒸汽滅菌後,由于某些成分的分解(如蔗糖)或氧化,使培養基的pH值會降低(一般會降低0.2左右)。有時玻璃皿質量較差,其中一部分物質溶解,也會影響酸度的變化,這些再調整培養基的pH值的時候都要考慮進去。

一般在比較成熟的情況下,會在培養基高壓蒸汽滅菌前調高一定的pH值,以便适應滅菌後pH值下降的問題,具體調高多少可根據自身實驗摸索。

7. 培養基的分裝。瓊脂約在40℃以下時凝固,因此配制好的培養基要趁熱分裝,分裝時一般用燒杯、漏鬥直接精選分注。若條件允許,用培養基灌裝機來分注會更加方便。

分裝時要掌握好分注量,多了即浪費又減小培養物的生長空間;少了又會因營養不足而影響生長,一般以占培養容器1/4 - 1/3左右為宜,培養基在培養容器中的厚度約為1.5cm。

分裝時要注意不要将培養基沾到管壁上,以免引起污染。分裝後立即塞上棉塞或者蓋上瓶蓋或封好封口膜,并在培養瓶上貼标簽或用記号筆在瓶壁上作好标注,然後進行滅菌。

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